형광 분광기의 내부 필터 효과란 ?

형광 분광기의 내부 필터 효과란 ?

내부 필터 효과는 특히 스펙트럼 측정에 영향을 미치는 형광  분광법의 일반적인 문제입니다. 

고농축 용액의 경우 조사 된 빔은 샘플에 의해 감쇠되며 여기  빔된 빔에 의해 표면만 강하게 형광을 발현하게 합니다. 

형광 분광기의 방출 모노크로메이터에 의해 이미지화 되는 데이터의 경우 큐벳의 중심을 감지 함으로 이 부분에서 나오는  형광  방출은 표면에 비하여 더 낮은 형광입니다. 

위에서 설명한 여기 빔의 감쇠는 기본 내부 필터 효과로 알려져 있습니다. 또한 여기와 방출 스펙트럼이 크게 겹치면 중앙에서 방출된 빛 이 시료 자체에서 재 흡수 될 수 있습니다.  이를 2차 내부 필터 효과라고 합니다.

내부 필터 효과로 인해 스펙트럼 왜곡이 발생하고 경우에 따라 신호가 완전히 손실 되므로 사용자는 이 효과를 식별하고  방지하는 방법을 에 대해 인식하고 있어야 합니다.

이를 줄이기 위해 샘플 농도를 낮추어 형광 스펙트럼을 측정하는 것이 좋습니다. 이는 농도에 대한 형광의 선 형 의 변화는 크지 않음을 알 수 있습니다.

위에서 언급한 바와 같이 내부 필터 효과 방지 내부 필터 효과 를 방지하는 가장 좋은 방법은 시료의 농도를 줄이는 것입니다. 이상적인 방법으로는 측정 전에 흡수 스펙트럼을 자료를 확인 하는 것 입니다. 일반적으로 여기 파장에서 광학 밀도가  0.1 미만이면 좋은 결과를 얻을 수 있습니다. 

이것이 충분하지 않은 경우 다음 방법을 시도 해 볼 수 있습니다.

• 샘플 흡광도가 감소하도록 다른 여기 파장을 선택합니다. 2차 내부 필터 효과를 피하기 위해 여기를 흡수 최대값 아래10‑50nm 로 이동하는 해보는 것 입니다.

• 저용량 큐벳 또는 삼각형 큐벳을 사용 하는 방법입니다. 이렇게 하면 결과적으로 경로 길이가 줄어들어 샘플 흡광도를 적게 할 수 있습니다.